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论说原位杂交（ISH）与荧光原位杂交（FISH）
这两种技术都是专门针对细胞内核酸序列的精密分析方法。
原位杂交（ISH）通过定位和检测细胞或切片内的核酸序列，为我们揭示了细胞的生命奥秘。而荧光原位杂交（FISH），凭借其荧光探针技术，展现出高序列互补性的优势，专长于染色体部分的显示。
虽然这两种技术的核心原理一致，即借助探针对特定核苷酸序列进行探测，但FISH借助了荧光探针这一创新手段，使其与常用的免疫化学中蛋白质定位方法有所不同。
无论是RNA、DNA或是其他核苷酸序列，原位杂交的应用都异常广泛。它在形态学上拥有独特优势的还以高灵敏度为核酸检测领域带来了性的变化。这些技术已被广泛应用于临床细胞遗传学、基因图谱绘制、生物学等多个领域。
2. 探究原位杂交方法的核心特性
3. 解析探针类型与适用场景
4. 原位杂交实验步骤详解
制片环节：对于染色体展开片，通常会选择酒精/醚（1:1）清洁过的玻片。在处理切片时，考虑到可能出现的丢失问题，我们会倾向于使用聚赖氨酸或戊二醛活化的明胶铬铝玻片。
样品处理与固定：为了保持的原始形态，我们需迅速将新鲜取出并固定。尽量避免使用如醋酸/乙醇和Carnoy’s等常见的沉淀固定剂，因为这些固定剂可能会影响细胞的通透性或改变目标核酸的结构，从而降低杂交效率。
嵌入与切片：固定后的样品通常会被石蜡或OCT嵌入，以便长期存储和切片。切片工作可以通过微切机或冷冻切片机完成，切片厚度通常为15-20μm。
渗透化处理：由于目标DNA或RNA序列常被蛋白质包围，这些蛋白质的交联可能会阻碍探针的渗透。进行渗透化处理是原位杂交不可或缺的一环。主要使用的渗透化试剂包括蛋白酶、盐酸和洗涤剂等。
预处理与前杂交：预处理阶段主要用来降低背景噪声，包括内源性酶的失活和RNase处理等步骤。
杂交过程：关键在于探针与互补靶序列的结合。杂交过程中的温度、盐浓度、pH值以及其他组分都会对杂交效率产生重要影响。
清洗工作：清洗是为了去除未结合或松散结合的探针。通过调节温度、盐浓度和洗涤剂浓度等参数，可以有效去除非特异性结合。
结果检测：对于放射性标记的探针，我们可以通过摄影胶片或摄影乳剂进行检测。对于非放射性标记的探针，我们则采用直接和间接两种方法进行检测。
