HEPES缓冲剂，也称为2-（4-（2-羟乙基）哌嗪）乙磺酸，其化学式对应的CAS编号为7365-45-9。这种化合物在生物化学研究领域扮演着重要角色，常被用于调节实验反应体系中的pH值，例如在病毒保存液或细胞保存液中，HEPES就是常见的成分之一。
在市场上，羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES主要以两种形式出售：粉末状试剂和预先配制的溶液试剂。对于HEPES溶液，其推荐使用浓度范围在10mmol/L至50mmol/L之间，而在细胞培养过程中，一般将培养液的HEPES浓度维持在20mmol/L，以充分发挥其缓冲效能。相较于传统的磷酸缓冲液，HEPES缓冲液具有多项优势，包括对细胞无毒害作用，能够长时间稳定地维持pH值，且作为一种优良的阳离子缓冲剂，表现出色。
关于HEPES缓冲剂的定义和应用
HEPES缓冲剂的解离常数在20摄氏度时为7.65，其pH缓冲范围从6.6延伸至8.6，因此特别适用于pH值在6.8至8.2之间的反应体系。这种缓冲剂的使用方式灵活，可以直接与氢氧化钠混合使用，也可以先与盐类物质混合，再通过氢氧化钠来调整pH值。
一、配制500毫升1mol/L HEPES缓冲液，pH值设定为7.0，原液（stock solution）的制备方法如下：首先称取0.5摩尔的羟乙基哌嗪乙磺酸（约119.15克），然后使用0.5M至1M的氢氧化钠溶液来调节至目标pH值，最后用蒸馏水将溶液定容至500毫升，配制好的溶液应在4摄氏度下密封保存。
[if !supportLists]二、[endif]配制含有少量盐的500毫升HEPES缓冲液：称取6.5克HEPES、8.0克氯化钠、0.198克磷酸氢二钠七水合物，将这些物质溶解于水中，并使用0.5M的氢氧化钠溶液来调整pH值，定容至500毫升后，进行低温保存。
[if !supportLists]三、[endif]配制2×HEPES缓冲盐溶液：将1.6克氯化钠、0.074克氯化钾、0.027克磷酸氢二钠二水合物、0.2克葡聚糖以及1克HEPES溶解于90毫升的蒸馏水中，使用0.5M的氢氧化钠溶液调节pH值，之后用蒸馏水将总体积补充至100毫升。
尽管HEPES缓冲液体系的应用不如磷酸盐缓冲液（PBS）那样普遍，但它在许多方面展现出独特的优势。PBS的离子强度通常高于HEPES，而离子强度的差异可能会影响混合溶液中其他溶质的溶解度。在大多数情况下，如果PBS适用，HEPES同样可以使用；然而，当HEPES成为必要选择时，PBS往往无法替代。
HEPES缓冲剂与PIPES缓冲剂在性质上存在相似之处，但PIPES的水溶性相对较差，因此可以制成PIPES钠盐形式使用。由德晟公司提供的这两种缓冲剂均为粉末状试剂，同时，根据客户需求，也可以将这些缓冲剂配制成特定浓度的即用型缓冲溶液。