原理介绍
在研究细胞运动和定位的过程中，我们依赖一种专一的、对活细胞无毒的探针——Cell Tracker Green。这一试剂被广泛应用在Live Cell Tracking Kit中，用于监测细胞的移动、位置、增殖、迁移等一系列动态过程。Cell Tracker Green的独特之处在于它是一种活细胞荧光示踪探针，这意味着它可以直观地揭示细胞的生理状态。这种探针通过被动扩散进入细胞，并与细胞内蛋白共价结合，形成一种长效的细胞示踪染料。一旦进入细胞内部，原本非荧光的Cell Tracker Green会被胞内酯酶水解，产生绿色荧光。这些荧光产物只在具有完整细胞膜的细胞中积聚，因此死细胞或无完整细胞膜的部分无法被染色。值得一提的是，Cell Tracker Green对pH变化并不敏感，并且可以通过甲醛或戊二醛进行固定。这个探针可以在活细胞中保留多代，并显示荧光至少一周。虽然它会被传递到子细胞，但不会扩散到相邻的细胞中。
实验前的准备
为了确保实验的顺利进行，我们需要准备一些必要的设备和试剂。所需耗材包括：一个24孔板，用于培养细胞；可调节式移液枪及枪头，用于精确操作液体；离心机，用于分离细胞；荧光显微镜或流式细胞仪，用于观察细胞的荧光情况；去离子水和PBS，用于清洗和稀释试剂。还需要特别注意Cell Tracker Green的保存和使用方式，确保其在冰上操作、避光保存，避免反复冻融。其他试剂如1×Assay Buffer和Staining Solution也需要按照说明进行准备。特别提醒，对于不同类型的细胞和实验条件，Cell Tracker Green的最终浓度需要根据经验进行调整。为了维持细胞的正常生理状态并减少潜在的干扰因素，应尽量保持染料浓度在较低水平。
实验步骤概述
实验的流程主要分为两部分：一是通过流式细胞仪进行定量检测，二是通过荧光显微镜进行观察。
对于流式细胞仪定量部分：首先按照既定方法处理细胞，并设立平行对照组。接着收集细胞（对于不同类型的细胞处理方式有所不同），然后将其重悬在Staining Solution中，并在黑暗条件下、37℃环境中孵育一段时间。之后通过离心清洗细胞，再次重悬在预热的培养基中以确保与探针的充分接触。将处理过的细胞通过流式细胞仪进行分析。
对于荧光显微镜检测部分：同样先按照方法处理细胞（包括非贴壁细胞和贴壁细胞），然后进行染色。染色完成后，可以通过荧光显微镜观察细胞的荧光情况。如果需要固定和透化细胞以进行后续操作（如抗体检测），可以按照固定和透化的步骤进行处理。其中固定过程通常采用含醛的固定剂进行，而后通过PBS清洗细胞。如果需要进行抗体检测，还需要将细胞在冰冷的丙酮中孵育以通透细胞膜。
